Qualificações e Defesas

Resumo

O diagnóstico histológico intraoperatório do envolvimento metastático linfonodal

representa uma das necessidades críticas durante a realização da biópsia do

linfonodo sentinela (SLN) em pacientes com carcinoma espinocelular de cabeça e

pescoço (CCECP). Pesquisas têm se concentrado no desenvolvimento de técnicas

moleculares para a detecção rápida de metástases linfonodais neste cenário. O

presente estudo apresentou como objetivo principal avaliar os resultados de um

estudo piloto de RT-PCR na biópsia de SLN em pacientes atendidos ao diagnóstico

nos ambulatórios de Otorrinolaringologia e de Oncologia Clínica do Hospital de

Clínicas da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), no período de janeiro

de 2010 a 2019, além de revisar a literatura existente sobre técnicas moleculares de

RT-PCR focadas nos principais marcadores tumorais primários associados às

metástases cervicais do CCECP, e estimar o tempo necessário para a realização da

análise molecular das biópsias de SLN utilizando qRT-PCR. Três pacientes com

CECPestágio cT1N0 da borda lateral da língua foram consecutivamente incluídos no

estudo. O qRT-PCR em tempo real foi realizado comkits de reagentes para expressão

gênica específicos: EpCAM (amplicon de 95 pb), DSG3 (amplicon de 69 pb) e HMBS

(amplicon de 125 pb). O tempo requerido para extração de RNA, conversão de RNA

para DNA e realização da PCR quantitativa foi estimado no Laboratório de Patologia

Clínica de nossa instituição. Além disso, foi realizada uma revisão da literatura para

identificar os marcadores moleculares mais relevantes no diagnóstico de metástases

do CECP, utilizando bases de dados como PubMed, Google Scholar e UniGene,

levando em consideração também o tempo necessário para o diagnóstico molecular.

Os resultados mostraram que a análise molecular das biópsias de SLN foi positiva

para metástases em dois pacientes, confirmadas histopatologicamente. Um paciente

apresentou resultados negativos tanto nos estudos moleculares quanto

histopatológicos. Durante a pesquisa, foram identificados dez potenciais marcadores

moleculares associados às metástases do CCECP, sendo E48, PVA, TACSTD1,

SCCA, PTHrP, CK13, CK14 e CK17 os que apresentaram resultados mais

promissores. O tempo estimado para a realização da análise molecular das biópsias

de SLN por qRT-PCR foi de aproximadamente duas horas e 30 minutos. Conclui-se

que a análise molecular intraoperatória dos SLNs no câncer oral mostra-se promissora

para a detecção precoce de metástases, podendo fornecer suporte valioso para a

decisão terapêutica dos cirurgiões. Estudos prospectivos com uma amostra maior são

necessários para confirmar e ampliar as evidências obtidas por este método.

Resumo

Em estudos recentes, foi demonstrado que a técnica de imagem por tempo de vida da fluorescência (FLIM) pode revelar detalhes estruturais intracelulares em preparações citológicas não coradas, que não são evidenciados por procedimentos de coloração padrão. O objetivo de nossa investigação foi examinar se as imagens FLIM poderiam identificar áreas sugestivas de polimerização em eritrócitos (glóbulos vermelhos) de pacientes com doença falciforme (DF). Examinamos lâminas de sangue não coradas utilizando imagens de autofluorescência FLIM de 45 pacientes com DF (26 com hemoglobinopatia SS, 12 SC, 4 Sbeta- e 3 Salfa-talassemia) e comparamos os resultados com os de 27 pessoas do grupo controle. Todos os eritrócitos do grupo controle apresentaram citoplasma homogêneo, sem focos evidentes. Já os eritrócitos com forma normal em pacientes com DF apresentaram entre zero e três pequenos pontos fluorescentes intensos, com maiores valores de tempo de vida da fluorescência. Nos eritrócitos falcizados, observamos adicionalmente áreas maiores e irregularmente moldadas, altamente fluorescentes, com valores aumentados de FLIM. Essas áreas foram interpretadas como equivalentes à hemoglobina polimerizada. Os eritrócitos com forma normal dos pacientes com DF, que apresentavam citoplasma homogêneo, não eram diferentes dos eritrócitos dos pacientes do grupo controle quando analisados por microscopia óptica. No entanto, variáveis da matriz transformada pelo padrão binário local dos valores FLIM por pixel mostraram diferenças significativas entre estes eritrócitos as células controle. Em uma análise discriminante linear, usando características de textura transformadas pelo padrão binário local (média e entropia) do citoplasma dos eritrócitos aparentemente normais, o modelo final conseguiu distinguir entre pacientes com DF e indivíduos do grupo controle com uma precisão de 84,7 . Quando a classificação foi baseada no exame de um único eritrócito arredondado, a precisão foi de 68,5 . Utilizando o método de classificação por Análise Discriminante Linear para aprendizado de máquina, a precisão foi de 68,1 . Acreditamos que nosso estudo demonstra que a FLIM é capaz de revelar a topografia do processo de polimerização intracelular da hemoglobina na doença falciforme e que as imagens obtidas são compatíveis com a teoria da nucleação em dois estágios. Além disso, acreditamos que a técnica apresentada pode ser uma ferramenta interessante para a investigação da inibição terapêutica da polimerização.

Resumo

Introdução: A síndrome de Turner (ST) é uma anomalia cromossômica que frequentemente causa perda auditiva e pode também estar relacionada a distúrbios do equilíbrio. Objetivo: Realizar uma avaliação abrangente do equilíbrio corporal em pacientes com síndrome de Turner, acrescentando evidências aos ainda escassos dados da literatura sobre comprometimento labiríntico nessas pacientes. Métodos: Pacientes adolescentes e adultas, bem como um grupo controle composto por mulheres saudáveis, foram submetidas a avaliações otorrinolaringológica, audiológica e vestibular. Esta última incluiu eletronistagmografia com provas calórica e rotatória, potencial evocado miogênico vestibular cervical e posturografia estática com testes dinâmicos. Resultados: Foram avaliadas 27 pacientes com idades entre 15 e 33 anos (média: 21,9 anos). O cariótipo 45,X foi identificado em 13/27 casos. Tontura foi referida por oito pacientes e perda auditiva progressiva por dez. A audiometria apresentou alterações em 13/27 casos: seis com perda sensorioneural, seis com perda condutiva e uma com padrão misto. Alterações do equilíbrio foram encontradas em 21/27 pacientes (78 ). Dezenove pacientes apresentaram lesão vestibular (12 periférica [57 ], quatro mistas [19 ], três centrais [11 ]) e duas apresentaram apenas déficit somatossensorial). Alterações não vestibulares foram identificadas em seis pacientes (22 ): cinco com déficit somatossensorial e uma com dependência visual. As alterações do equilíbrio não se associaram ao cariótipo (45,X versus outros cariótipos), à idade, nem à perda auditiva. O grupo controle foi composto por 20 mulheres saudáveis com idades entre 27 e 35 anos (média: 30,5 anos); 4/20 (25 ) apresentaram alterações do equilíbrio — duas periféricas e duas causas centrais — uma frequência significativamente menor que a observada no grupo com ST (p < 0,001). Conclusão: Apesar da baixa frequência de sintomas vestibulares e auditivos autorreferidos, este estudo revela uma alta taxa de comprometimento da orelha interna entre mulheres com ST, com vias auditivas e vestibulares frequentemente afetadas, muitas vezes de forma subclínica ou compensada. Esses achados reforçam a importância de protocolos abrangentes de triagem e indicam que intervenções adequadas, incluindo a reabilitação vestibular, devem ser consideradas como parte do acompanhamento clínico dessa população.