Qualificações e Defesas

Resumo

O melanoma cutâneo (MC) é o tumor mais agressivo de pele. O sucesso da imunoterapia em pacientes com MC indica que o sistema imune tem papel fundamental no desenvolvimento tumoral. O cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4 (CTLA-4) inibe a ativação dos linfócitos T por meio da sua ligação com proteínas de superfície da família B7 em células apresentadoras de antígeno. O CTLA-4 pode ser identificado também em melanócitos anormais, permitindo a evasão do sistema imune. O CTLA-4 é codificado pelo gene polimórfico CTLA-4. Os objetivos do estudo foram verificar se as variantes de nucleotídeo único (SNVs) no gene CTLA-4, c.-1765C>T, c.-1478G>A, c.-1577G>A e c.-1661A>G influenciam o risco, as manifestações clínicas dos pacientes e biológicas do tumor e a sobrevida dos pacientes com MC, bem como suas consequências funcionais. Foram avaliados 432 pacientes com MC e 504 controles (doadores de sangue). Os genótipos das SNVs do CTLA-4 foram identificados por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR). As expressões do CTLA-4 com a SNV de maior interesse (SNV com resultados mais significativos em risco e sobrevida) em indivíduos com genótipos distintos das SNVs foram avaliadas por PCR quantitativo (qPCR) e pelo ensaio da luciferase. Análises de ciclo celular, proliferação, apoptose/necrose e migração foram realizadas em linhagens celulares SK-MEL-28 e A-375 modificadas para apresentar os genótipos homozigotos ancestrail ou variante da SNV de maior interesse pela técnica de Clusters of Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR). O significado estatístico entre grupos foi calculado pelo teste de Fisher ou qui-quadrado e pela regressão logística. As comparações entre expressões gênicas e análises dos ensaios celulares foram realizadas por meio dos testes-t e ANOVA ou teste de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis. As sobrevidas foram avaliadas pelos testes de Kaplan Meier e log-rank e por análises de Cox. Os indivíduos com o genótipo AA da CTLA-4 c.-1577A>G e com o genótipo combinado AA + AA das SNVs CTLA-4 c.-1577A>G e c.-1478G>A estiveram sob riscos 1,60 e 3,12 vezes maiores de desenvolver MC, respectivamente. O genótipo CTLA-4 c.-1577AA foi associado com menor sobrevida livre de eventos (SLE) com 1,80 vezes mais chances de recidiva ou progressão de MC, a maior expressão do gene, maior proliferação, menor apoptose e maior migração de células quando comparado ao genótipo CTLA-4 c.-1577GG. Os resultados obtidos poderão contribuir para o entendimento da fisiopatologia do MC e para identificar indivíduos com alto risco de ocorrência do tumor e pacientes com prognóstico desfavorável.

Resumo

A proteína transidrogenase de NAD(P)⁺ mitocondrial (NNT) tem sido implicada em alterações metabólicas observadas na obesidade. Camundongos com o fundo genético C57BL/6J possuem uma mutação espontânea no gene Nnt, apresentando ausência de expressão desta proteína. Esses camundongos são conhecidos por apresentar maior suscetibilidade a distúrbios metabólicos induzidos por dieta. A maioria dos estudos sobre NNT no contexto da obesidade induzida por dieta comparou camundongos C57BL/6J com outras linhagens de camundongos, onde diferenças no fundo genético podem atuar como fatores confundidores. Além disso, esses estudos predominantemente utilizaram uma dieta rica em gordura (HFD), composta por aproximadamente 60 das calorias provenientes de gordura, o que pode não reproduzir com exatidão as dietas ricas em gordura do mundo real para humanos. Neste estudo, nosso objetivo foi investigar a influência da NNT na disfunção metabólica e obesidade induzidas por dieta, utilizando camundongos congênicos para ausência de NNT e uma HFD com aproximadamente 45 das calorias provenientes de gordura. Nossos resultados indicam que os camundongos sem NNT são mais protegidos contra o ganho de peso induzido pela HFD, mas apresentam um desempenho pior no teste de tolerância à glicose, embora não no teste de tolerância à insulina. Notadamente, o tecido adiposo marrom interescapular dos camundongos Nnt^+/+ alimentados com HFD apresentou uma maior massa e uma taxa de consumo de oxigênio ex vivo mais elevada, considerando-se todo este tecido. Além disso, a HFD aumentou a expressão dos marcadores inflamatórios Iba1, Il1b e Tlr4 e no hipotálamo dos camundongos Nnt^-/-. Em conclusão, estes resultados mostram a importância da NNT no contexto da síndrome metabólica e obesidade induzidas por dieta, indicando sua contribuição para atenuar a inflamação hipotalâmica e sugerindo seu papel no aumento da massa do tecido adiposo marrom interescapular.

Resumo

O coronavírus SARS-CoV-2 causa a COVID-19, pandemia respiratória decretada em 2020. Os ácidos graxos modulam as respostas à infecção pelo SARS-CoV-2 e seus níveis circulatórios são elevados em indivíduos com obesidade. Não está claro se os ácidos graxos não esterificados alfa linolênico, Ala, e esteárico, Est, podem modular a entrada do vírus e a resposta inflamatória de macrófagos e de células epiteliais pulmonares ao SARS-CoV-2, contribuindo com as alterações observadas em indivíduos obesos. O objetivo do presente estudo foi avaliar qual entre os dois tipos celulares concentra maior expressão de genes envolvidos com a entrada do vírus nas células e na resposta inflamatória quando expostas ao SARS-CoV-2. Ainda, como o vírus afeta a expressão destes genes em indivíduos obesos e se a expressão destes genes seria modulada de forma semelhante por Ala e Est. Para tal, foram analisados dois conjuntos de dados de sequenciamento de RNA de células únicas (scRNA-seq). O primeiro avaliou macrófagos e células epiteliais purificadas de tecido pulmonar de pacientes com COVID-19. Neste, observamos que, em comparação às células epiteliais, os macrófagos concentram maior expressão de TMPRSS2, IFITM3, AXL, genes relacionados à internalização viral, além das citocinas inflamatórias IL-1 β, TNFα e de IFNλ. Macrófagos derivados de THP-1 e células Beas-2B (epiteliais brônquicas) foram incubados com SARS-CoV-2 e então submetidos à quantificação da expressão de genes alvo por qPCR, confirmando os achados do scRNa-seq. Por isso focamos os seguintes experimentos apenas nos macrófagos. No segundo scRNA-seq o objetivo foi avaliar macrófagos pulmonares de indivíduos com COVID-19, com obesidade ou não. Os macrófagos dos indivíduos obesos apresentaram maior expressão de ACE2, TMPRSS2 E IFITM3 e menor expressão de IFNλ. Macrófagos derivados de THP-1, que foram expostos ao vírus ou à sua proteína spike recombinante na presença de Ala ou de Est foram submetidos a qPCR, em que vimos que a exposição ao vírus causou nos mesmos uma infecção não produtiva que induziu aumento da expressão gênica de TMPRSS2, AXL, IL-1β, IL-10 e de NLRP3, que indica a formação de inflamassomos. Ambas as incubações com Ala e com Est associados ao vírus potencializaram o aumento da expressão de IL-1β induzido pelo vírus e permitiram o aumento da expressão de IFITM3, da citocina TNFα e de SOD-2, enzima mitocondrial que converte ânion superóxido em peróxido de hidrogênio. Somente a co-incubação com Ala preveniu o aumento da expressão de TMPRSS2 e de NLRP3 promovidos pelo vírus. Somente a co-incubação com Est e vírus elevou a expressão de IFNβ e IFNλ. A incubação dos macrófagos derivados de THP-1 com a proteína spike recombinante, somente quando aliada à co-exposição ao Ala ou ao Est, promoveu aumento da expressão de ACE2, o receptor de SARS-CoV-2, e de IL-1β. Dessa forma, concluímos que os macrófagos, enquanto células imunes, são o principal ator da resposta inflamatória induzida pelo vírus SARS-CoV-2 nos pulmões dos pacientes com COVID-19 e que Ala e Est atuam de forma sinérgica com o vírus modulando as respostas de macrófagos ao SARS-CoV-2 de forma comparável a modulação promovida pela obesidade.

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Introdução: O atendimento em unidade de emergência de pacientes com enfermidades ortopédicas requer, com frequência, a realização de procedimentos terapêuticos dolorosos e que geram ansiedade e desconforto ao paciente. O uso de técnicas de sedação e analgesia para procedimentos (SAP) no pronto-socorro está associada a redução de desconforto e apreensão, além de evitar memórias traumáticas e facilitar a execução dos procedimentos.

Objetivo: Propor um protocolo assistencial multidisciplinar uniformizado para sedação e analgesia de pacientes ortopédicos adultos submetidos a procedimentos na sala de emergência.

Método: Discussão em reuniões multidisciplinares mensais para a elaboração de um fluxograma de cuidados relacionado a sedação e analgesia em unidade de emergência. Foram realizados quatro encontros envolvendo equipe da diretoria médica, ortopedia, medicina de emergência, farmácia, enfermagem e núcleo de qualidade e segurança em saúde. O estudo foi desenvolvido em quatro etapas principais: definição do conteúdo do protocolo, estruturação e pesquisa, elaboração do protocolo clínico e validação do protocolo pelos profissionais.

Resultados: Elaboração do protocolo através de recomendações e fluxograma de cuidados baseado em levantamento bibliográfico.

Conclusão: A utilização do protocolo de sedação e analgesia em procedimentos ortopédicos deve orientar a equipe de emergência no direcionamento do paciente, na escolha da medicação, nos cuidados adequados e na avaliação dos critérios de alta.

Resumo

Introdução: O Transtorno do Espectro Autista é uma condição do neurodesenvolvimento, com alterações sociocomunicativas e comportamentais, e prejuízos na funcionalidade ao longo da vida. Há vasta literatura sobre o autismo em crianças e adolescentes, mas a funcionalidade, incapacidade e suas repercussões na vida adulta, foco deste estudo, ainda carecem ser melhor investigadas. Objetivo Geral: Investigar os níveis de saúde e de deficiência de pessoas autistas adultas por meio do World Health Disability Assessment Schedule - WHODAS 2.0. Método: Pesquisa aprovada pelo CEP sob n.4.541.106. Estudo observacional descritivo transversal, com 60 pessoas adultas autistas, de 18 a 65 anos, níveis 1 e 2 de apoio. Os participantes responderam a um questionário semiestruturado, contendo dados clínicos-sociodemográficos e ao World Health Disability Assessment Schedule 2.0, versão autoadministrada, de 36 itens. Realizou-se estatística descritiva e análise de regressão linear dos dados quantitativos, tomando dados sociodemográficos e clínicos como variáveis independentes e escores da escala como variável dependente, e Análise de Conteúdo dos dados qualitativos, tomando-se a Classificação Internacional de Funcionalidade, Incapacidade e Saúde - CIF como base conceitual para as categorias e subcategorias. Resultados: Apresentados no modo alternativo de tese por 2 artigos. Amostra predominantemente feminina, com alto nível de escolaridade, com predomínio de diagnóstico tardio de autismo, após os 30 anos, e classificada como nível 1 de apoio. Houve discrepância entre níveis de apoio e o autorrelato de suporte familiar. As dificuldades de comunicação social foram as mais referidas (96,67 ), seguidas das sensoriais (90 ), cognitivas (81,67 ), seletividade alimentar (70 ), e comportamentais (45 ), assim como alta frequência de comorbidade (86,67 ), principalmente de ansiedade e depressão, e uso de medicação (80 ). Os escores gerais de funcionalidade indicam maior prejuízo nos domínios de relações interpessoais (66,9), atividades de vida (63,7), participação (56,4) e cognição (48,7), e menor impacto nos domínios de autocuidado (27,2) e mobilidade (33,1). Na análise qualitativa, as dificuldades do autismo impactaram os seis domínios de vida da CIF, com maior prejuízo em cognição, relações interpessoais, atividades de vida e participação, corroborando os resultados do WHODAS 2.0. Dificuldades sensoriais-alimentares e cognitivo-comportamentais tiveram ampla interferência, inclusive nos domínios de autocuidado e mobilidade. Houve prejuízo em atividades e participação nos contextos sociais, educacionais e de trabalho, com barreiras físicas - estímulos sensoriais, sociais - acesso a serviços de saúde e atitudinais - incompreensão e estigmas. Conclusão: Resultados quantitativos e qualitativos estão em consonância e evidenciam a importância da avaliação da funcionalidade baseada na abordagem biopsicossocial, que considera as deficiências como resultado da interação entre a pessoa autista e o ambiente, dá voz às pessoas adultas autistas, tornando-as ativas e coparticipativas no processo de compreensão da sua condição de saúde e de suas necessidades. A discrepância entre os níveis de apoio e de suporte familiar demonstram divergências entre a análise dos profissionais e a autopercepção dos participantes quanto ao nível de funcionalidade. O diagnóstico tardio e a falta de suporte acarretam impactos na vida e interfere no nível de funcionalidade das pessoas.