Avaliação da Taxa de Transcrito dos Genes ITGA3 e ITGB1 após overload de Albumina em Podócitos in vitro

RESUMO

INTRODUÇÃO: A presença de proteinúria persistente, mesmo em quantidade bastante reduzida, (microalbuminúria), constitui-se em um importante indicativo de doença glomerular e de desenvolvimento de doença renal crônica. Na lesão glomerular, a principal proteína presente na urina é a albumina. Neste caso, a albuminúria decorre do comprometimento da barreira de filtração glomerular (BFG), podendo se associar a lesão dos podócitos (células epiteliais viscerais), das células endoteliais e/ou da membrana basal glomerular. Os podócitos são células altamente especializadas e diferenciadas que recobrem os capilares glomerulares na face externa (urinária) da membrana basal glomerular e são compostos por três diferentes segmentos morfológica e funcionalmente diferentes: um corpo celular, processos principais e pedicelos, que são longas projeções citoplasmáticas. Diversas proteínas estão envolvidas na manutenção da estrutura e da função da BFG e podem afetar direta ou indiretamente o rearranjo do citoesqueleto de actina dos podócitos, entre elas as integrinas

OBJETIVOS: O objetivo do presente trabalho foi avaliar se há diferença de expressão dos genes ITGA3 e ITGB1 frente ao overload progressivo de albumina em podócitos in vitro, sem e com exposição prévia à droga nefrotóxica puromicina aminoglicosídeo (PAN).

MÉTODOS: Foi realizado cultura de podócitos humanos in vitro, utilizando uma linhagem celular condicional imortalizada doada pelo Prof. Moin Salem, Bristol University UK – que expressam um promotor SV40 sensível à temperatura, o que permite sua proliferação enquanto indiferenciados a 33ºC e sua diferenciação à 37ºC. Após diferenciação, as células foram expostas a 0, 3, 20, e 40 mg/ml de albumina bovina com e sem exposição prévia à 15 ug/uL de PAN. O RNA total dos podócitos foi extraído, transcrito em cDNA, e foi realizada a PCR quantitativa em tempo real (qPCR, n=4). O programa SPSS foi utilizado para realizar a estatística descritiva e o teste de Friedman, com o p <0,05 considerado significante.

RESULTADOS: Com relação aos resultados da exposição progressiva de albumina para o gene ITGA3, observamos uma diminuição de expressão entre a condição de 20 mg/mL para 40 mg/mL (p= 0,022) na condição sem PAN, mas não houve diferença de expressão na condição com PAN. Em contrapartida, para o gene ITGB1, não houve diferença estatística entre as condições sem PAN, mas observamos um aumento de expressão entre as condições de 0 a 20 mg/mL((p= 0,012) e 0 a 40 mg/mL (p= 0,022) na condição com PAN.

CONCLUSÃO: A diminuição significativa de expressão do transcrito do gene ITGA3 pode ser um indício de que a proteinúria em níveis altos e por período longo seja um insulto aos pedicelos. No entanto, no caso do ITGB1, o seu aumento pode significar um mecanismo de defesa dos pedicelos, para tentar manter os pedicelos aderidos à BFG. Ressaltamos, no entanto, que este estudo é um piloto e que esses dados devem ser confirmados em modelo in vivo.

BIBLIOGRAFIA: Mundel P, Kriz W. Structure and function of podocytes: an update. Anat Embryol (Berl). 1995 Nov;192(5):385–97. Saleem MA, O’Hare MJ, Reiser J, Coward RJ, Inward CD, Farren T, et al. A conditionally immortalized human podocyte cell line demonstrating nephrin and podocin expression. J Am Soc Nephrol [Internet]. 2002 Mar [cited 2015 Jul 3];13(3):630–8. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11856766 Sterk LMT, De Melker AA, Kramer D, Kuikman I, Chand A, Claessen N, et al. Glomerular extracellular matrix components and integrins. Cell Adhes Commun [Internet]. 1998 [cited 2022 Mar 26];5(3):177–92. Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9686316/

PALAVRA-CHAVE: Podocitopatias, proteinúria, overload, podócitos in vitro, integrinas ⍺3B1