O papel seletivo da enzima eNOS no efeito cronotrópico da 6-nitrodopamina endógena em átrios isolados de camundongos

RESUMO

INTRODUÇÃO: 6-nitrodopamina (6-ND) é uma nitro-catecolamina que atua como mediador endógeno sobre o sistema cardiovascular, com efeito cronotrópico positivo. Sua liberação basal em átrios e ventrículos não é afetada pela incubação prévia com o bloqueador de canais de sódio, Tetrodotoxina, indicando que a fonte de 6-ND no coração não é neurogênica [1]. A frequência cardíaca de camundongos nocaute para a isoforma endotelial da enzima Óxido Nítrico Sintase (eNOS) se apresentou reduzida quando comparada com o grupo controle, já nos animais nocaute para as outras isoformas, neuronal (nNOS) e induzida (iNOS), esse parâmetro não sofreu alteração [2], sugerindo que a eNOS poderia exercer um papel importante no efeito cronotrópico positivo da 6-ND endógena. Nesse contexto, a incubação de átrios com N-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME), mas não o inibidor de guanilato ciclase solúvel no sítio heme (ODQ), provoca redução significativa na frequência atrial [1], outra evidência do papel endógeno da 6-ND como um agente cronotrópico.

OBJETIVOS: Uma vez que o L-NAME inibe as três isoformas de NO sintase [3], o presente objetivou avaliar a liberação basal de 6-ND e o efeito do L-NAME na frequência atrial em camundongos nocaute seletivos para as enzimas NO sintase.

MÉTODOS: Os protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unicamp (CEUA/UNICAMP; nº5959-1/2022; 6067-1/2022 e 6087-1/2022). Foram utilizados camundongos adultos de ambos os sexos (peso: 18 a 22 g), camundongos controle (C57BL/6), nocaute nNOS-/-, nocaute iNOS-/- e nocaute eNOS-/-. A eutanásia foi realizada por overdose de isoflurano (inalatório), em que os animais foram expostos à uma concentração maior que 5% até 1 minuto após a parada da respiração. O coração foi removido e o átrio direito e os ventrículos separados e suspendidos separadamente em um banho de órgãos contendo 3 mL de solução de Krebs-Henseleit (KHS) e ácido ascórbico (3 mM) continuamente gaseada com uma mistura (95% O2 / 5% CO2) a 37ºC por 30 minutos. Uma alíquota de 2 mL do sobrenadante foi transferido para tubos Eppendorff âmbar e posteriormente 6-ND foi quantificada por Cromatografia Líquida Acoplada à Espectometria de Massas em tandem (LC-MS/MS) [1]. Para análise da frequência atrial, o átrio direito, de outros animais de cada grupo, foi montado em banhos de órgãos com um sistema de aquisição de dados PowerLab 400 que registra a força de tensão do tecido. Após um período de estabilização, L-NAME (0,1 mM) foi adicionado ao banho de órgãos e as alterações na frequência atrial foram monitoradas por 30 minutos.

RESULTADOS: A liberação basal de 6-ND não sofreu alteração nos animais nocaute nNOS-/- e iNOS-/-, em contrapartida, foi observado uma redução significativa nos camundongos eNOS-/- quando comparados com o grupo controle, tanto no átrio direito quanto nos ventrículos. A incubação com L-NAME (0.1 mM) provocou diminuição significativa na frequência atrial dos animais controle (antes 365 +/- 17 e depois 337 +/- 12, n=8), nNOS-/- (antes 367 +/- 9 e depois 338 +/- 13, n=8) e iNOS-/- (antes 423 +/- 19 e depois 341 +/- 22, n=7), mas não apresentou efeito na frequência atrial dos camundongos eNOS-/- (antes 272 +/- 24 e depois 286 +/- 26, n=8).

CONCLUSÃO: A enzima eNOS desempenha um papel muito importante na produção de 6-ND como um mediador do cronotropismo cardíaco.

BIBLIOGRAFIA: [1] Britto-Júnior J, et al. 6-NitroDopamine is an endogenous modulator of rat heart chronotropism. Life Sci.2022;307:120879. [2] Kurihara N, et al. Role of nNOS in blood pressure regulation in eNOS null mutant mice. Hypertension.1998;32:856-61 [3] Griffith OW, Kilbourn RG. Nitric oxide synthase inhibitors: amino acids. Methods Enzymol.1996;268:375-92.

PALAVRA-CHAVE: Óxido Nítrico Sintase Tipo III