Efeitos genotóxicos do herbicida Roundup®️ Original DI sobre células da tireoide humana

RESUMO

INTRODUÇÃO: Os efeitos desreguladores endócrinos de compostos a base de glifosato são bem conhecidos, mas pouco se sabe sobre os efeitos carcinogênicos do Roundup®️, herbicida mais frequentemente utilizado no Brasil e no mundo. Diferentes concentrações podem ter efeitos citotóxicos e proliferativos em células normais, mas também em células que já albergam alguma mutação. Como nódulos de tireoide e tumores clinicamente ocultos são muito frequentes na população, a exposição ao Roundup®️ poderia estar relacionada com o aumento de incidência de tumores da tireoide verificado em todo o mundo nas últimas décadas. Em trabalho anterior, demonstramos que mesmo baixas concentrações de Roundup®️ Original DI, abaixo do Nível de Exposição Ocupacional Aceitável (AOEL=160µg/L) e das doses de Ingestão Diária Aceitável (IDA=830µg/L) determinadas pela ANVISA, foram capazes de causar a morte das células da tireoide normais (Nthy-ori 3-1) e das que derivam de tumores papilíferos com mutações de RET/PTC (TPC-1). Exposição das linhagens Nthy-ori 3-1 e TPC-1 por 24h na concentração AOEL causou a morte de 52% e 58% das células, respectivamente, enquanto IDA resultou em 43% e 58% de morte celular. Ao contrário, o ensaio CCK-8 mostrou que pequenas concentrações de Roundup®️ tem efeito proliferativo: 6,5 µg/L aumentou o número de células Nthy-ori e TPC-1 em 24h para 113% e 118%, respectivamente, e esse efeito estimulador persistiu após 48h. Comprovando o efeito proliferativo do Roundup®️, o ensaio BrdU mostrou importante efeito estimulador de crescimento em ambas as linhagens, mas principalmente sobre TPC-1, mesmo em doses baixas. Esses efeitos, citotóxicos mas também proliferativos, poderiam estar relacionados a genotoxicidade induzindo morte mas também mutações oncogênicas?

OBJETIVOS: Investigar possíveis efeitos genotóxicos do herbicida a base de glifosato Roundup®️ Original DI em diferentes células tireoidianas.

MÉTODOS: Utilizamos 3 linhagens celulares derivadas de tireoide humana: a TPC-1 e BCPAP (provenientes de carcinoma papilífero e que albergam mutações de RET e de BRAF, respectivamente) e Nthy-ori 3-1, (células foliculares normais). Empregamos o ensaio cometa em duplicata para medir a porcentagem de DNA na cauda das células expostas por 24h e 48h a diferentes concentrações de Roundup®️ Original DI, comparadas com um controle positivo (H2O2).

RESULTADOS: Demonstramos que o Roundup®️ provocou efeitos clássicos de um deregulador endócrino com uma dose-resposta não monotônica em todas as linhagens tireoidianas estudadas. Todas as concentrações, incluindo AOEL e IDA, provocaram danos ao DNA na linhagem BCPAP em 24h, até maior após 48h de exposição a determinadas doses. Entretanto, a linhagem TPC-1 se mostrou resistente ao Roundup®️, pois somente a maior dose de 6500 µg/L provocou genotoxicidade importante em 24h. Já na linhagem controle Nthy-ori 3-1, a exposição por 24h à menor (6,5 µg/L) e à maior (6500 µg/L) dose foram as que provocaram maior porcentagem de danos, 97% e 100%, respectivamente.

CONCLUSÃO: Nossos dados demonstram que o Roundup®️ Original DI é genotóxico mesmo em baixas concentrações, causando lesão de DNA em células tireoidianas. No entanto, seus efeitos são distintos em diferentes linhagens celulares. Enquanto as células da BCPAP (proveniente de carcinoma papilífero pouco diferenciado, com mutação BRAF) são mais sensíveis, a TPC-1 (de carcinoma papilífero que possui alteração de RET) são mais resistentes. Esses efeitos podem estar envolvidos na associação entre esse herbicida amplamente utilizado em todo o mundo e o aumento da taxa de incidência de nódulos e câncer de tireoide e/ou podem estar associados à diferente agressividade observada nos tumores tireoidianos.

BIBLIOGRAFIA: Dal' Bó IF, Teixeira ES, Rabi LT, Peres KC, Nascimento M, Chiamolera MI, Máximo V, Bufalo NE, Ward LS. Alternation between toxic and proliferative effects of Roundup®️ on human thyroid cells at different concentrations. Front Endocrinol (Lausanne). 2022 Jul 29;13:904437. doi: 10.3389/fendo.2022.904437. PMID: 35992109; PMCID: PMC9382701. Pellegriti G, et al;. Worldwide increasing incidence of thyroid cancer: update on epidemiology and risk factors. Journal of cancer epidemiology. 2013 Bai SH, Ogbourne SM. Glyphosate: environmental contamination, toxicity and potential risks to human health via food contamination. Environmental science and pollution research international. 2016 de Souza JS, Kizys MM, da Conceição RR, Glebocki G, Romano RM, Ortiga-Carvalho TM, Giannocco G, da Silva ID, Dias da Silva MR, Romano MA, Chiamolera MI. Perinatal exposure to glyphosate-based herbicide alters the thyrotrophic axis and causes thyroid hormone homeostasis imbalance in male rats. Toxicology. 2017 Feb 15;377:25-37. doi: 10.1016/j.tox.2016.11.005. Epub 2016 Dec 1. PMID: 27916585. Saiselet M, et al;. Thyroid cancer cell lines: an overview. Frontiers in endocrinology. 2012 NOTA TÉCNICA Nº 23/2018/SEI/CREAV/GEMAR/GGTOX/DIRE3/ANVISA.

PALAVRA-CHAVE: Tireoide, desregulador endócrino, herbicida, glifosato, genotoxicidade.