Efeitos de diferentes agentes antioxidantes na produção/liberação de 6-nitrodopamina pela artéria umbilical humana in vitro

RESUMO

INTRODUÇÃO: A dopamina, neurotransmissor bem conhecido no sistema nervoso central, também é um importante modulador da pressão arterial, equilíbrio de sódio, função renal e adrenal, sendo relevante para a patogênese e/ou manutenção de hipertensão. Curiosamente, derivados de dopamina, como araquidonoil-dopamina foram encontrados no sistema nervoso central e outro derivado da dopamina, a 6-nitro-dopamina, também teve liberação basal identificada em HUCV [1] e em anéis aórticos de Chelonoidis carbonaria [2] pelo endotélio desses vasos. Está bem estabelecido que as células endoteliais modulam a reatividade vascular através da liberação de mediadores como prostaciclina, óxido nítrico e endotelina. A atividade vasodilatadora da 6-nitrodopamina (6-ND) nos vasos do cordão umbilical humano é mediada pelo antagonismo seletivo do receptor D2 da dopamina [1], e a produção/liberação endotelial de 6-ND é dependente da produção de NO.

OBJETIVOS: Aqui pretendemos caracterizar a participação de espécies reativas derivadas de oxigênio e nitrogênio (ROS e RNS, respectivamente), na produção/liberação de 6-ND pela artéria umbilical humana (HUA) in vitro.

MÉTODOS: Foram coletados cordões umbilicais (HUC) de 37 voluntárias normotensas, com idade entre 18-40 anos, sem uso de medicação regular e sem pré-eclâmpsia, diabetes mellitus pré-gestacional ou gestacional, submetidas a parto natural ou cesariana[1]. O protocolo foi aprovado pelo comitê de ética local. Os HUCs coletados foram imediatamente colocados em solução de Krebs-Henseleit e as HUAs foram então isolados e cortados em anéis de 15 mm de comprimento. Anéis pareados do mesmo HUA foram incubados, durante 30 min, isoladamente ou na presença de: superóxido dismutase (SOD; 250U/ml), catalase (1000U/ml), resveratrol (100M), ácido úrico (1mM), ebselen (100M), GSK2795039 (1M) ou GKT137831 (1M). Ao final do período de incubação, o sobrenadante foi separado e armazenado a -20C até ser analisado por HPLC-MS/MS [3].

RESULTADOS: Nenhum dos tratamentos afetou a liberação de norepinefrina, epinefrina ou dopamina da HUA. No entanto, a produção/liberação de 6-ND foi significativamente aumentada quando os anéis HUA foram incubados na presença do inibidor tipo-1/4 NOX GKT137831. Esse efeito também foi observado na presença de SOD, enquanto a presença concomitante de catalase aboliu esse efeito. Apesar da falta de significância estatística, a presença de agentes capazes de diminuir a concentração de peróxido de hidrogênio (H2O2) (como catalase ou ebselen) tendeu a diminuir a produção/liberação de 6-ND.

CONCLUSÃO: O aumento da produção/liberação de 6-ND devido à redução da disponibilidade do ânion superóxido por SOD ou GKT137831 pode estar ligado ao aumento da biodisponibilidade de NO (devido à inibição da formação de peroxinitrito), de acordo com nossos achados anteriores sobre o endotelial NO-dependente 6- Formação de ND por HUAs. A participação de H2O2 não pode ser excluída, pois a adição de catalase reverteu os efeitos de SOD, além da tendência observada de menor produção/liberação de 6-ND na presença de catalase ou ebselen.

BIBLIOGRAFIA: [1] Britto-Júnior J, et al. 6-Nitrodopamine is released by human umbilical cord vessels and modulates vascular reactivity. Life Sci. 2021;276:119425. [2] Campos R, Jacintho FF, Britto-Júnior J, Mónica FZ, Justo AFO, Pupo AS, Moreno RA, de Souza VB, Schenka AA, Antunes E, De Nucci G. Endothelium modulates electrical field stimulation-induced contractions of Chelonoidis carbonaria aortic rings. Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 2020 Jul;233:108763. doi: 10.1016/j.cbpc.2020.108763. [3] Britto-Júnior J, et al. Determination of dopamine, noradrenaline, and adrenaline in Krebs-Henseleit solution by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry and measurement of their basal release from Chelonoidis carbonaria aortae in vitro. Biomed Chromatogr. 2020;35(2):e4978.

PALAVRA-CHAVE: 6-nitrodopamina, catecolaminas endoteliais, cordão umbilical.