ESTUDO TRANSCRICIONAL DO TECIDO ADIPOSO MESENTERIAL NA DOENÇA DE CROHN ASSOCIADO A VARIÁVEIS CLÍNICAS PODEM CONSTITUIR NOVO BIOMARCADOR DE PROGNÓSTICO NO PÓS-OPERATÓRIO

RESUMO

INTRODUÇÃO: A doença de Crohn (DC) é uma doença de acometimento intestinal de característica transmural e idiopática. O papel do tecido adiposo mesenterial (TAM) no desenvolvimento ou complicações da DC não é bem estabelecido. No entanto, há um aumento macroscópico característico do TAM próximo à área intestinal afetada. Estudos recentes do nosso grupo de pesquisa apontaram para a modulação na expressão de diversos transcritos no TAM de pacientes com DC.

OBJETIVOS: Validar a expressão de microRNAs e seus genes alvos modulados no TAM de pacientes com DC comparados a uma coorte controle. E correlacionar a validação da expressão desses transcritos com as características clínicas e epidemiológicas dos pacientes no pré-operatório.

MÉTODOS: A casuística do estudo é formada por 25 pacientes com DC ileocecal ativa submetidos à cirurgia de ressecção intestinal pelo Serviço de Coloproctologia da Disciplina de Moléstias do Aparelho Digestório da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp). O grupo controle (CTR) foi composto por 15 pacientes operados por outras doenças, exceto doença inflamatória intestinal. A caracterização clínica e epidemiológica dos pacientes foi realizada previamente à cirurgia. A partir das biópsias coletadas, realizou-se a validação biológica por meio da expressão gênica por Real-time PCR do microRNA 650 e do microRNA 29c e dos seus genes alvos GFPT2 e ALDH4A1 e E2F1, HIF3A, CIDEC e PDK4, respectivamente. Para as análises da modulação dos transcritos e das variáveis clínicas foram realizados os testes estatísticos two-way ANOVA com replicação e Kruskal-Wallis, com significância de p<0,05. A partir dos dados de expressão gênica e características clínicas foram construídos modelos matemáticos baseados em regressão linear múltipla relacionados ao prognóstico de recidiva da doença. Os modelos gerados passaram por um filtro estatístico com critério de p-valor<0,5 de todas as variáveis utilizadas no modelo e R-quadrado (R^2) ajustado superior a 0,8, para garantir a confiabilidade e robustez. O presente projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Unicamp.

RESULTADOS: A validação biológica por RT-qPCR mostrou o aumento significativo na expressão do microRNA 650 (p=0,03) e a diminuição dos seus genes alvos GFPT2 (p=0,026) e ALDH4A1 (p=0,0063) quando comparado os grupos de pacientes DC e CTR. Diferente do esperado pela literatura, o microRNA 29c (p=0,0032) também apresentou maior expressão nos pacientes DC em relação aos CTR. Da mesma forma que seus alvos genéticos apresentaram modulação negativa E2F1 (p=0,007), HIF3A (p=0,0029), CIDEC (p=0,001) e PDK4 (p=0,0054). Para estimar o período de ocorrência de recidiva da doença foram gerados 4095 modelos matemáticos através de regressão linear múltipla. Após a passagem pelos filtros estatísticos foram identificados 4 modelos matemáticos que apresentaram robustez suficiente para prever o tempo de recidiva da doença (M1, R^2 ajust.: 0,89; M2, R^2 ajust.: 0,92; M3, R^2 ajust.: 0,92; M4, R^2 ajust.: 0,97).

CONCLUSÃO: Pela primeira vez foi demonstrado a modulação de dois microRNAs no TAM de pacientes com DC, além da modulação de seus alvos genéticos. Os modelos matemáticos gerados a partir da correlação entre a expressão gênica no TAM e as características clínicas dos pacientes podem estabelecer prognóstico de recidiva da DC no pós-operatório. A tecnologia gerada foi registrada no INPI (Instituto Nacional de Propriedade Industrial) pela INOVA/Unicamp e pode vir a constituir uma ferramenta potencial para orientar o manejo clínico dos pacientes após a ressecção cirúrgica.

BIBLIOGRAFIA: (1) Coffey JC, O’Leary DP. The mesentery: structure, function, and role in disease. Lancet Gastroenterol Hepatol 2016;1:238–47. (2)Singh SK, Pal Bhadra M, Girschick HJ, Bhadra U. MicroRNAs - micro in size but macro in function. FEBS J 2008;275(20):4929-44. (3) Silva FAR, et al. Whole transcriptional analysis identifies markers of B, T and plasma cell signaling pathways in the mesenteric adipose tissue associated with Crohn’s disease. J Transl Med 2020;18:44.

PALAVRA-CHAVE: doença de Crohn; biomarcador; pós-operatório