Efeito de diferentes concentrações do herbicida Roundup® Original DI sobre linhagens celulares tireoidianas normais e neoplásicas

RESUMO

INTRODUÇÃO: A incidência de câncer de tireoide (CT) tem aumentado de maneira significativa nas últimas décadas. Dentre os vários fatores que contribuem para esse aumento, os desreguladores endócrinos (DE) são especulados por alterar a homeostase hormonal, causar disfunção tireoidiana (hipotireoidismo) e promover o aparecimento de bócio e tumores tireoidianos. No entanto, não se sabe ao certo sobre as concentrações nas quais estes compostos químicos possuem efeito desregulador e seu mecanismo de ação. Uma vez que o sistema endócrino responde a baixas concentrações químicas, é essencial determinar os efeitos dos DE em diferentes doses. Há muito se suspeita de efeitos desreguladores e carcinogênicos dos herbicidas a base de glifosato (HBG), mas pouco se sabe sobre o efeito deste composto usado na vida real, em várias concentrações; em células normais; e em células tumorais da tireoide.

OBJETIVOS: Pensando nisso, este estudo teve como objetivo estudar os efeitos in vitro de um herbicida a base de glifosato (Roundup® Original DI) em linhagens celulares tireoidianas. Utilizando duas linhagens derivadas de tireoide humana, a TPC-1 (proveniente de carcinoma papilífero) e Nthy-ori 3-1, (células foliculares tireoidianas) testamos 15 diferentes concentrações (variando de 6,5 µg/L a 6.500 µg/L) incluindo o Nível Aceitável de Exposição Ocupacional (AOEL) e Ingestão Diária Aceitável (IDA), presentes na Nota Técnica (Processo nº 25351.056754/2013-17) da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA).

MÉTODOS: Os ensaios Azul de Tripan (AT), Cell Counting Kit – 8 (CCK-8) e BrdU foram empregados para avaliar citotoxicidade, atividade metabólica de células viáveis e efeito proliferativo com exposições de 24 e 48 horas em triplicatas técnicas e biológicas.

RESULTADOS: O azul de tripan mostrou diminuição no número de células viáveis na exposição de 24h em comparação com 48h em ambas as linhagens. Exposição das células Nthy-ori 3-1 e TPC-1 por 24h na concentração AOEL causou a morte de 52% e 58% das células, respectivamente, enquanto IDA resultou em 43% e 58% de morte celular. Após 48h de exposição, AOEL e IDA causaram um número menor de células mortas de Nthy-ori 3-1 (19% e 15%) e TPC-1 (29% e 23%), respectivamente, sugerindo que o efeito tóxico do produto desaparece e/ou ambas as linhagens possuem mecanismos de reparo protetores de exposições mais longas. De fato, o ensaio CCK-8, mostrou que pequenas concentrações de Roundup® Original DI tem efeito proliferativo, algumas ultrapassaram os 100% de viabilidade: 6,5 µg/L aumentou o número de células Nthy-ori 3-1 e TPC-1 em 24h para 13% e 18% a mais que o controle, respectivamente, e esse efeito estimulador persistiu após 48h. Comprovando o efeito proliferativo do Roundup® Original DI, o ensaio BrdU mostrou importante efeito estimulador de crescimento em ambas as linhagens, mas principalmente sobre TPC-1, mesmo em doses baixas. Esse efeito se intensificou após 48h de exposição.

CONCLUSÃO: Concluímos que células da tireoide expostas ao Roundup® Original DI apresentam uma curva dose-resposta não monotônica, característica de um desregulador endócrino. Concentrações baixas do pesticida, tidas como aceitáveis, causam morte celular, mas também tem efeito proliferativo, especialmente nas células TPC-1. Esse herbicida, amplamente utilizado em todo o mundo, talvez desempenhe um papel no aumento da taxa de incidência de nódulos e câncer de tireoide que vem sendo observadas nas últimas décadas.

BIBLIOGRAFIA: Pellegriti G, et al;. Worldwide increasing incidence of thyroid cancer: update on epidemiology and risk factors. Journal of cancer epidemiology. 2013 Bai SH, Ogbourne SM. Glyphosate: environmental contamination, toxicity and potential risks to human health via food contamination. Environmental science and pollution research international. 2016 de Souza JS, Kizys MM, da Conceição RR, Glebocki G, Romano RM, Ortiga-Carvalho TM, Giannocco G, da Silva ID, Dias da Silva MR, Romano MA, Chiamolera MI. Perinatal exposure to glyphosate-based herbicide alters the thyrotrophic axis and causes thyroid hormone homeostasis imbalance in male rats. Toxicology. 2017 Feb 15;377:25-37. doi: 10.1016/j.tox.2016.11.005. Epub 2016 Dec 1. PMID: 27916585. Saiselet M, et al;. Thyroid cancer cell lines: an overview. Frontiers in endocrinology. 2012 NOTA TÉCNICA Nº 23/2018/SEI/CREAV/GEMAR/GGTOX/DIRE3/ANVISA. .

PALAVRA-CHAVE: Tireoide, desregulador endócrino, glifosato, pesticida, citotoxicidade, proliferação.