Esta tese descreve a validação de um método sensível para a determinação de 6-nitrodopa, 6-nitrodopamina, 6-nitroadrenalina e 6-cianodopamina em solução de Krebs-Henseleit, utilizando LC-MS/MS com ionização por eletrospray positivo (ESI+). A espectrometria de massas de alta resolução (HRMS) foi empregada para caracterizar com precisão as estruturas dos íons fragmentados. O método foi aplicado para investigar a liberação basal de catecolaminas em átrios e ventrículos isolados de coelhos. Os átrios e ventrículos foram suspensos separadamente em um banho de órgãos com 5 mL de solução de Krebs-Henseleit, contendo ácido ascórbico (3 mM), gaseificada (95 O2/5 CO2) a 37°C por 30 minutos. Cartuchos SPE Strata-X 33 μm foram utilizados para a extração das catecolaminas e do padrão interno 6-nitrodopamina-d4. A separação das catecolaminas foi realizada usando uma coluna Shim-pack GIST C18-AQ de 150 x 3 mm (com tamanho de partícula de 3 mm), mantida a 40°C e perfundida com 65 de fase móvel A (Metanol/Água; 90/10, v/v) + 0,4 de ácido acético e 35 de fase móvel B (água deionizada) + 0,2 de ácido metanoico, a uma taxa de 320 μL/min em modo isocrático. O método apresentou linearidade na faixa de 0,1–20 ng/mL. Pela primeira vez, esse método permitiu identificar a liberação basal das três nitrocatecolaminas mencionadas e de um análogo pertencente a uma nova classe de catecolaminas, as cianocatecolaminas.
